Семинары и конференции 2017
Информация для пациентов
Спортивная медицина
Мед.товары на экспорт
Новости
Полезные статьи
Будь здоров!
Объявления
Отзывы и пожелания
Медицинские печатные издания
Вход в личный кабинет
Логин:
Пароль:
20.05.2013

Влияние энзимов на формирование послеоперационных спаек в брюшной области

"Mucos Pharma CZ" ООО Представительство

Общая информация | Прайс-лист | Новости компании | Схема проезда | Фотогалерея

Публикации  »  Публикации  »  Новости  »  Новости Фармацевтических и Медицинских компаний

С.В. Минаев, В.С. Обозин, Г.М. Барнаш, А.Н. Обедин

Ставропольская государственная медицинская академия (СтГМА), кафедра детской хирургии, г. Ставрополь, РФ

Влияние энзимов на формирование послеоперационных спаек в брюшной области

Сергей Викторович Минаев / e-mail: sminaev@yandex.ru Ключевые слова: спаечный процесс, VEGF, bFGF, ламинин, профилактика.

 

Краткий обзор и введение

Спайкообразование остается ча­стой проблемой после абдоминального вмешательства. Однако с появлением специфических агентов, целенаправ­ленно использующихся против воспа­лительных процессов и неоангиогенеза, начинает развиваться новый подход к борьбе со спайкообразованием.

Методы: 70 взрослых крыс были разделены на две группы: энзимную (35 крыс) и контрольную (35 крыс). По­сле этого была проведена лапаротомия с десерозированием слепой кишки и париетальной брюшины. В энзимной группе применялся препарат Вобэнзим (комбинация высокоактивных фермен­тов растительного и животного проис­хождения + рутозид), растворенный в 2 мл стерильного физиологического рас­твора, который вводился через желу­дочный зонд в течение 21 дня. Живот­ным из контрольной группы вводился только физиологический раствор без ферментов. В первый, третий, седьмой и двадцать первый послеоперационные дни животные выводились из исследо­вания по восемь крыс из каждой груп­пы. Проводилось определение VEGF, bFGF и ламинина в висцеральной и париетальной брюшине животных при иммуногистохимическом (ИГХ) анализе.

Результаты: Средний уровень спай-кообразования в энзимной группе был существенно ниже, чем в контрольной группе. Сравнение двух групп пока­зало, что экспрессия VEGFa ,bFGFа и ламинина в энзимной группе ниже, чем в контрольной группе. Более того, что в энзимной группе концентрация bFGFа и ламинина достигла пика на седьмой день, тогда как в контрольной группе это произошло в 21ый день.

Выводы: Наше исследование уста­новило, что проводимая полиэнзимная терапия после созданного спаечного процесса в брюшной полости умень­шает выраженность послеоперационных фиброзных сращений. Данный бла­гоприятный эффект объясняется более низким уровнем ангиогенных агентов (VEGF, bFGF) и ламинина после приема гидролитических энзимов.

Введение

Спайкообразование в брюшной по­лости является главной причиной, при­водящей к инвалидности и летальным исходам в абдоминальной хирургии. Патогенез развития спаечного процесса является многосторонним и недоста­точно изученным. Любая операция на органах брюшной полости сопровожда­ется выпадением фибрина. Последние могут привести к развитию спаечной болезни (СБ), которая является главной причиной кишечной непроходимости (КН). Несмотря на прогресс в лече­нии СБ, доля осложнений, в том числе и развитие КН, все еще остается доста­точно высокой. На сегодняшний день ангиогенные агенты, такие как VEGF, bFGF и ламинин, в абдоминальной хирургии изучены мало. Вместе с тем исследования ангиогенеза в процессе спайкообразования очень важны для целенаправленной профилактики и ле­чения спаечной непроходимости.

В медицине гидролитические энзи­мы, принимаемые внутрь, используют­ся в лечении различных заболеваний и патологических состояний. Исполь­зование комбинации энзимов показало более высокий результат, чем примене­ние моноферментных форм. Энзимные препараты хорошо переносятся и безо­пасны. Системная энзимотерапия пред­ставляет собой терапевтический подход, состоящий из перорального приема вы­соких доз гидролитических животных и растительных энзимов. Цель нашего исследования — изучение роли ангио-генных факторов в брюшном фиброзе и влияние протеолитических энзимов на ангиогенез спаечного процесса в брюш­ной полости.

Материалы и методы

Эксперимент был поставлен на 70 взрослых крысах с массой тела 150-180 г. Животные были разделены на две группы: энзимную (32 крысы) и кон­трольную (32 крысы). Шесть животных составили группу сравнения. Модели­рование спаечного процесса в брюшной полости проводили путем выполнения срединной лапаротомии с десерозиро-ванием стенки толстой кишки и брюши­ны передней брюшной стенки этиловым спиртом. В энзимной группе крысам был прописан через желудочный зонд пре­парат Вобэнзим (комбинация животных и растительных протеолических фер­ментов: Панкреатин 345 P.E.P.-U (100 мг), Трипсин 360 F.I.P-U (24 мг), Химотрип-син 300 F.I.P-U (1 мг), Амилаза 50 F.I.P-U (10 мг), Липаза 34 F.I.P-U (10 мг), Папаин 90 F.I.P-U (60 мг), Бромелаин 225 F.I.P-U (45 мг), Рутин (50 мг)), растворенный в 2 мл стерильного физиологического раствора. В течение 21 дня крысам эн­зимной группы вводилась через желу­дочный зонд полиэнзимная смесь в дозе 100 мг/кг в день. Контрольная группа получала через желудочный зонд то же количество физиологического раствора без ферментов два раза в день. В первый, третий, седьмой и двадцать первый по­слеоперационные дни выводились из ис­следования по восемь крыс из каждой группы для проведения исследования. Исследована брюшная полость живот­ных с подсчетом спаек и определением степени спайкообразования с исполь­зованием методики Р.А. Женчевско-го двумя исследователями, которым была неизвестна принадлежность крыс к какой-либо из групп. Проводилось определение VEGF, bFGF и ламинина в висцеральной и париетальной брюши­не животных с помощью ИГХ анализа. Использовали моноклональные антите­ла к белку базальной мембраны — Ла-минину (Laminin γ1, R&D Systems, Inc.), к факторам ангиогенеза: к васкулоэн-дотелиальному фактору (VEGF, R&D Systems, Inc.) и к основному фактору роста фибробластов (bFGF, R&D Systems, Inc.). Рабочая концентрация антител со­ставляла 5-8 μг/мл для исследуемых тка­ней с толщиной нарезки 5-15 μм. Клетки сосудистых эндотелиальных клеточных мембран и/или их цитоплазмы, в ко­торых присутствовали VEGF и bFGF, окрашивались в желто-коричневый цвет. Было исследовано не менее 5 полей зрения в случайном порядке под свето­вым микроскопом на увеличении х400, число клеток, накапливающих фактор ангиогенеза, подсчитывали в 500 эндотелиоцитах. Регистрация результата проводилась согласно количественному соотношению клеток, накапливающих маркер, и критерию, сформулированно­му на Пекинской конференции по стан­дартизации ИГХ методов диагностики: 0-25%: VEGF и bFGF отрицательный (-); 26-50%: слабо положительный (+); 51-75%: умеренно положительный (++); 76-100%: резко положительный резуль­тат (+++).

Рисунок 1.

Микрофото на 3-й сутки экспери­мента (окраска — гематоксилин и эо­зин, х80): В контрольной группе сохра­нились отек и сосудистая гиперемия, кровоизлияние, диффузная инфиль­трация серозной оболочки полиморф-ноядерными лейкоцитами.


Ламинин исследовался с помощью определения моноклональных антикры­синых γ 1 антител к Ламинину. Интерпре­тация результатов окраски: резко поло­жительный результат (+++) — Ламинин в виде выраженной темно-коричневой жирной линии по базальной мембране капилляра; умеренно положительный результат (++) — выраженная корич­невая прерывистая жирная линия по базальной мембране капилляра; слабо положительный результат (+) — Ламинин в виде поверхностного фрагмента коричневого окрашивания по базальной мембране капилляра и отрицательный результат (-) — отсутствие Ламинина.

Все статистические анализы были проведены с использованием программ­ного обеспечения Biostatistics, версия 4.03 (McGraw Hill, USA). Данные были выражены в виде среднего значения со стандартным отклонением. Оценка вы­раженности спаечного процесса и тка­невого повреждения осуществлялось критериями Краскела — Уоллиса и теста Хи-квадрат.

Результаты

Контрольная группа показала бо­лее высокий процент слепокишечных спаек, чем энзимная группа (тест хи-квадрат=23.1, df=2, p=0.001). Процент­ное содержание животных без спаечного процесса составило 20% в контрольной группе и 60% — в энзимной группе.

В обеих группах животных в 1-й и 3-й дни эксперимента мы выявили на большой части висцеральной брюши­ны отмечали десквамацию и разрушение эпителиальных клеток в обеих группах животных. Подлежащая соединитель­нотканная строма была отечна и раз­рыхлена с выраженными сосудисты­ми нарушениями (гиперемия сосудов, стазы, тромбоз и кровоизлияния). В контрольной группе сохранялся отек и гиперемия сосудов, кровоизлияние, диффузная инфильтрация серозной обо­лочки полиморфноядерными лейкоци­тами. В энзимной группе степень отека в соединительной ткани была ниже, но сосудистые нарушения сохранились.

К 7-м суткам оставались поврежде­ния на периетальной брюшины в обеих группах животных. Визуализировалась тонкая полоска фибрина. Однако боль­шая часть фибрина в энзимной группе была лизирована, особенно вдоль краев поражения. Также отмечалась пролифе­рация мезотелия. В контрольной группе отек брюшины уменьшился и снизилась выраженность сосудистой реакции. Стенка кишечника была инфильтро-вана нейтрофильными лейкоцитами, имелась эозинофильная инфильтрация. В энзимной группе было зафиксировано растворение микротромбов, рассасыва­ние кровоизлияний и исчезновение стаза. Отмечались случаи периваскулярной лимфоцитарной инфильтрации.

К 21-м суткам определялось полное рассасывание фибрина в контрольной группе, с последующей заменой фибрина грануляционной тканью и образовани­ем спаек между листами висцеральной брюшины. Образованные спайки были богаты клеточными элементами (фибро-бластами, гистиоцитами, лимфоцитами, плазмоцитами, а также многоядерны­ми гигантскими клетками). В энзимной группе спайки состояли из грануляци­онной ткани, где вдобавок к новообразо­ванным сосудам и клеточным элементам наблюдались пучки новых коллагеновых волокон. В грануляционной ткани воспа­лительных процессов не было. Местами в брюшине, в основном периваскулярно, присутствовала лимфоплазматическая инфильтрация.

Наше исследование установило сни­жение спаечного процесса в энзимной группе. Сравнение двух групп показало, что экспрессия VEGF, bFGF и ламини­на в энзимной группе была ниже, чем в контрольной группе. В энзимной груп­пе концентрации bFGF и ламинина были самыми высокими к 7-м суткам экспе­римента, в то время как в контрольной группе максимальная концентрация на­блюдалась к 21-м суткам.

Обсуждение

Факторы роста, такие как VEGF и bFGF, могут вызвать и ускорить об­разование кровяных капилляров. VEGF известен как самый важный фактор, на­прямую влияющий на рост кровеносных сосудов, и его экспрессия тесно связана с плотностью капиллярной сети и коли­чеством новых сосудов.

Подобным образом обладает bFGF, который считается фактором, стиму­лирующим пролиферацию клеток ме-зодермального и нейроэктодермального происхождения, включая фибробласты, эндотелиальные клетки, нейробласты и кератиноциты. bFGF — хемотаксиче-ский и митогенный фактор роста для эндотелиальных клеток в лабораторных условиях, вызывающий эндотелиально-клеточное производство факторов, участвующих в разрушении базальной мембраны и перемещении капиллярных эндотелиальных клеток в коллагенсодержащий матрикс для последующе­го образования капилляроподобных структур. Эти и другие наблюдения в лабораторных условиях показывают, что FGF в естественных условиях игра­ет роль в модуляции таких процессов, как ангиогенез, заживление ран и вос­становление тканей, включая спаечный процесс в брюшной полости.

Ангиогенез является неотъемлемым этапом при формировании спаек. Па­тологический ангиогенез происходит тогда, когда эффект стимулирующих молекул превосходит эффект ингиби-рующих. Проведенные исследования показали, что ангиогенез подразумева­ет больше чем простую пролиферацию эндотелиальных клеток. Эндотелиоци-ты делятся и внедряются в базальную мембрану, а затем подвергаются диффе-ренцировке и участвуют в формирова­нии капилляров. Этот процесс контро­лируется ангиогенными молекулами, а также другими факторами, такими как распавшиеся ферменты, которые опо­средуют вышеуказанный процесс. При­ем смеси ферментов, содержащей броме-лаин, трипсин, химотрипсин и папаин, стимулирует клеточную экспрессию факторов роста, VEGF, bFGF, PDGF-BB и TIMP-1. Известно, что добавление протеаз стимулирует цитотоксичность периферических нейтрофилов in vitro. Проведенное исследование показало [3], что полиферментный препарат Вобэн-зим увеличивает уровень ингибитора ангиогенеза (TIMP-1) и снижает уро­вень стимуляторов ангиогенеза в крови (VEGF и bFGF).

Экстраклеточный матрикс (ЭКМ) — это вещество, окружающее нижний слой соединительной ткани эпителиальных или эндотелиальных клеток. ЭКМ яв­ляется одним из важных условий для васкуляризации. В нашем исследовании ламинин был главным показателем ЭКМ, который ярко экпрессировался у всех крыс в контрольной группе. Целостность брюшного мезотелия — самый важный элемент для физиологического предот­вращения спайкообразования. Брюш­ной мезотелий ответственен за появле­ние фактора активации плазминогена, который содействует лизису фибрина, и этот процесс лизиса наиболее активен в первые 3-4 дня после образования фибрина в очаге воспаления. Применение Вобэнзима в данный период привело к снижению развития мезотелиальных спаек в энзимной группе по сравнению с результатами в контрольной группе.

Другие исследования также показа­ли, что бромелаин или энзимные смеси замедляют воспалительные реакции у эндотоксических мышей, в основном снижением γ-интерферона в Пейеро-вых бляшках и селезенке. Изменения в соотношении функций Thl/Th2 по­сле системной энзимной терапии были также продемонстрированы Engwerda с соавт., которые установили, что бро­мелаин и трипсин улучшают реакцию Т-зависимых антител в естественных условиях и обеспечивают переход к Тп2-подобному цитокиновому профи­лю в лабораторных условиях. Для того чтобы узнать, может ли усиление реак­ции рецептора IL-4 и IL-10 в нормаль­ных условиях снизить цитокиновую реакцию после операции, необходимы дальнейшие исследования.

При эндотоксемии прием гидроли­тических энзимов (трипсин, бромелаин, химотрипсин, амилаз, липаз и папаина) не только снижал показатели коли­чества лимфоцита, но также приводил к специфическому снижению количе­ства CD4+ клеток в воспалительных тканях. Это представляет особый ин­терес, потому что считается, что CD4+ клетки способствуют развитию воспалительных процессов и поддерживают их. Общепринято, что воспалительное поражение при рассеянном склерозе, язвенно-некротическом колите и ревма­тоидном артрите происходит благодаря этим клеткам. Протеазы, содержащиеся в Вобэнзиме, обладают противовоспа­лительным эффектом.

Наше исследование показало, что системная энзимная терапия снижает число случаев воспалительных процес­сов при оперативных вмешательствах, таким образом препятствуя образова­нию послеоперационных спаек у крыс. Сочетание животных и растительных протеаз способствует адекватному био­логическому ответу.

Известно, что бромелаин, папаин и амилаза способствуют выработке ци-токинов в лабораторных условиях в пе­риферийных мононуклеарных клетках. Прием энзимных смесей, содержащих в своем составе бромелаин, трипсин, химотрипсин и папаин, способствует экспрессии фактора некроза опухоли-альфа (ФНО-а), интерлейкина-1β и интерлейкина-6 мононуклеарными клетками заново при инкубировании в условиях ex vivo с гамма-интер-феронами. Также было установлено, что протеазы вызывают респираторный взрыв в гранулоцитах с сопутствующим появлением активных форм кислорода. Известно, что добавление протеаз спо­собствует усилению цитотоксичности в периферийных нейтрофилах в лабо­раторных условиях. В исследованиях, проведенных в условиях in vitro и in vivo, трипсин способствовал гидроли-зированию «спаечных» молекул CD44, CD4 и B7 активированных Т-клетками и макрофагами. Бромелаин и папаин в полиферментном препарате также гидролизуют CD44 и способствуют улучшению реакции на трипсин. Как следствие этих эффектов, происходила активация Т-лимфоцитов и макрофагов, которые способствовали снижению вос­палительных реакций.

Выводы

Наше исследование установило, что проводимая полиэнзимная терапия после созданного спаечного процесса в брюшной полости уменьшает выра­женность послеоперационных фиброз­ных сращений. Данный благоприятный эффект связан со снижением уровня ангиогенных факторов (VEGF, bFGF) и ламимина на фоне пероральной по­лиэнзимной терапии.

Благодарность

Авторы выражают благодарность профессору Эндрю Б. Пинтеру за по­мощь в подготовке рукописи.

Финансирование: Исследование фи­нансировалось грантом Президента РФ МД-84.2008.7

За дополнительной информацией обращаться:

тел: (+998 90) 370-37-73

mucos.uz@inbox.ru

www.wobenzym.uz        

 


Товар сертифицирован. Услуги лицензированы




Все новости компании:
Женское здоровье: Вульво-вагинальный кандидоз (молочница). Вопросы и ответы.... 

Вобэнзим: Вопрос-ответ недели-3... 

Женское здоровье: Фиброзно-кистозная мастопатия. Вопросы и ответы.... 

Женское здоровье: Аднексит. Вопросы и ответы.... 

Вобэнзим: Вопрос-ответ недели-2... 

Женское здоровье: Мастопатия. Вопросы и ответы.... 

Вобэнзим: Вопрос-ответ недели-1... 

Вобэнзим: комплексная поддержка женского здоровья... 

ИНСТРУКЦИЯ по применению препарата ВОБЭНЗИМ ... 

Общие вопросы о препаратах... 

Энзимы способствуют не только сохранению здоровья, но и продлению жизни!... 

Системная энзимотерапия: вопросы и ответы... 

Часто болеющие дети... 

Если снова беспокоят вены... 

Жизнь человека - борьба за выживание!... 

Антибиотики + Вобэнзим = двойной удар по инфекции... 

Новые открытия и новые технологии в медицине. ГИНЕКОЛОГИЯ... 

Как отдохнуть без проблем?!... 

Новые технологии в косметологии... 

ВОБЭНЗИМ - лечение без осложнений!... 

Энзимотерапия... 

Новые технологии в урологии... 

Влияние энзимов на формирование послеоперационных спаек в брюшной области... 

Просмотров: 3606
В этой теме действует премодерация комментариев.
Вы можете оставить свой комментарий.
Гость_
Антибот:
- Сайт модерируется. Из комментариев удаляются бессмысленные, оскорбительные или не относящиеся к теме обсуждения.
- При написании комментария вы можете использовать теги BB-кода (BBCode).
Список поддерживаемых тегов.

Яндекс.Метрика Рейтинг@Mail.ru Gorodskidok.uz
Сайт разработан ООО "Norma Hamkor". Все имущественные права на сайт принадлежат ООО "GISinfo".
Адрес: 100105, Узбекистан, г. Ташкент, ул. Таллимарджон, 1/1
Тел.: (998 71) 283-39-26; факс: (998 71) 283-39-23
E-mail: info@apteka.uz , admin@apteka.uz
Любое копирование материалов сайта возможно только с активной гиперссылкой на www.apteka.uz
Все товары, подлежащие обязательной сертификации, сертифицированы; лицензируемые услуги – лицензированы.
© ООО «GISinfo»; 2013. Все права защищены.