Диагностика сифилиса в реакции микропреципитации

АНТИГЕН КАРДИОЛИПИНОВЫЙ ДЛЯ РЕАКЦИИ МИКРОПРЕЦИПИТАЦИИ

(Сифилис-АгКЛ-РМП)

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор применяется при диагностике сифилиса для исследования плазмы или инактивированной сыворотки в реакции микропреципитации (РМП).

Набор рассчитан на проведение 1000 определений.

ПРИНЦИП МЕТОДА

В антигенных структурах Treponema pallidum имеется липопротеиновый антиген, в ответ на который в организме больного формируются "реагины", представляющие собой смесь антител классов M и G. Реагины появляются в сыворотке нелеченных больных через 2-3 недели, а в спинно-мозговой жидкости через 4-8 недель после заражения. Антигенный комплекс, возникающий в спиртовом растворе кардиолипина, лецитина и холестерина (АгКЛ), способен связываться с реагинами, что и регистрируется в реакции микропреципитации (выпадение хлопьев разной величины).

Реагент 1 – антиген кардиолипиновый (АгКЛ) - раствор в спирте этиловом абсолютированном трех высокоочищенных липидов: кардиолипина - 0,03 %; лецитина - 0,27 % и холестерина - 0,9 %; 10 ампул (по 2,0 мл).

Реагент 2 – раствор холин-хлорида в 0,9 % растворе натрия хлористого; 2 флакона (по 5,0 мл).

Реакцию проводят с плазмой или инактивированной сывороткой обследуемых лиц. Для постановки реакции кровь берут из пальца. Перед взятием крови в пробирку вносят 5,0%-ный раствор натрия лимоннокислого, взятого капилляром аппарата Панченкова до метки “50”. Затем тем же капилляром набирают кровь дважды до отметки “0” и вносят в ту же пробирку, перемешивают с раствором натрия лимоннокислого и центрифугируют (если необходимо вскоре после взятия крови приступить к исследованию) при 1000-2000 об/мин в течение 15 минут.

Полученную плазму используют для проведения реакции микропреципитации. При постановке реакции с сывороткой кровь берут из вены в объеме 5-10 мл, отделяют ее от сгустка, инактивируют при температуре (56+1) ⁰С в течение 30 мин и используют в реакции.

Пробы, предназначенные для исследования, могут храниться до 5 дней при температуре (6+2)^оС или не более 6 недель при минус 20^оС.

Потенциальный риск применения набора – класс 1.

Меры предосторожности – соблюдение “Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР” (Москва, 1981 г.).

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

· Центрифуга лабораторная, обеспечивающая угловую скорость 1000-2000 об/мин;

· термостат или водяная баня, обеспечивающие температуру прогревания (37+1) ⁰С или (56+1) ⁰С, соответственно;

· секундомер;

· пипетки Пастеровские;

· пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,02 и 5,0 мл;

· пробирки вместимостью 10 мл;

· вода очищенная (дистиллированная или деионизированная);

· 0,9% раствор натрия хлористого;

· стекло или пластина из плексигласа;

· перчатки резиновые или пластиковые.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

Приготовление эмульсии АгКЛ

Перед приготовлением эмульсии проверить прозрачность ампулированного антигена. При выпадении кристаллов холестерина их растворить нагреванием ампул в термостате или водяной бане при температуре (37+1) ⁰С или (56+1) ⁰С, соответственно.

К определенному объему 0,9 % раствора натрия хлористого добавить равный объем антигена кардиолипинового. Смесь перемешать и оставить при комнатной температуре на 30 мин, после чего центрифугировать при 1000-2000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость слить. К осадку добавить 3,5 объема (по отношению к взятому антигену) 10 % раствора холин-хлорида на 0,9 % растворе натрия хлористого.

Хранить антигенную эмульсию в плотно закрытой стеклянной емкости без доступа света не более 6 сут. при температуре (4+2) ⁰С.

Допускается хранение антигенной эмульсии при комнатной температуре в течение 14 сут. при условии внесения в нее мертиолята натрия до конечной концентрации 0,01 %.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

На обычное стекло или углубление пластинки из плексигласа наносят 3 капли нативной плазмы или инактивированной сыворотки, затем добавляют 1 каплю антигенной эмульсии. Ингредиенты перемешивают покачиванием пластины в течение 5 мин, затем в каждую лунку добавляют по три капли 0,9 % раствора натрия хлористого, вновь перемешивают покачиванием пластины и оставляют при комнатной температуре на 5 мин (оптимальный температурный режим реакции 23-28 ⁰С).

Учет результатов реакции

Результаты реакции учитываются при освещении не ниже 300 люкс. При исследовании плазмы или инактивированной сыворотки от больных сифилисом наблюдается положительная реакция в виде выпадения хлопьев разной величины, а с плазмой или инактивированной сывороткой от здоровых лиц наблюдается отрицательная реакция в виде опалесценции.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя в сухом, защищенном от прямых солнечных лучей месте при температуре от 10 до 25 ^оС в течение всего срока годности. Замораживание не допускается.

Срок годности набора – 1 год.

По вопросам приобретения и использования набора следует обращаться по адресу: Ташкент, ул.Мавлянова, 26/1. ООО "Denis Med»; тел. (8-371) 235-42-44, 235-15-84, 233-64-59.